Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 57 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
achieved, formaldehyde or a heat treatment is immediately added/applied to 
each test tube to inhibit additional microbial growth prior to absorbance reading 
and use of the UV-VIS. The absorbance or transmittance is read ad 580 nm or 
530 nm.
USP <81> states the following criteria for both the Plate and Tube Methods: 1) 
The calculated potency of the test antibiotic [U3] must be 80% to 125% of the 
median reference standard [S3] 2) Relative standard deviation for all 
measured and calculated data is NMT 10% and 3) Testing is performed in 
triplicate over a period of three independent test runs. The Tube Method 
further states: The percentage coefficient of determinations (%R2) for each 
standard curve will be NLT 90% (i.e. correlation coefficient of NLT 0.950) and 
2) Absorbance values of the media reference standard [S3] are predetermined 
per antibiotic. Refer USP <81> for testing parameters and acceptable data 
requirements.
Diagram 7 below summarizes the operations prior, during and after testing 
using the Tube Method (Hewitt and Vincent 1989). 

---

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R