Pharmaceutical Microbiology Manual

F
OOD AND 
D
RUG 
A
DMINISTRATION
 
O
FFICE OF 
R
EGULATORY 
A
FFAIRS
 
Office of Regulatory Science
 
Document Number: 
ORA.007 
Revision #: 02 
Revised: 
25 Aug 2020 
Title:
Pharmaceutical Microbiology Manual 
Page 69 of 92
For the most current and official copy, check QMiS. 
growth and restrict the size and height of colonies of more rapidly 
growing molds. 
d. TSA w/5% Sheep Blood Agar is beneficial for cultivating 
fastidious microorganisms.
e. MacConkey Agar is used for the isolation and differentiation of 
Gram negative and enteric organisms. 
f. RODAC plates and Hycheck slides are used for the detection 
and quantification of microbiological contamination. 
F. Analytical Procedure 
1. Approximately 100 ml of sterile media, MLB or other suitable media, 
should be aseptically added to each plastic bag containing a square 
sponge swab. Mix or swirl thoroughly. 
2. Approximately 10 ml of sterile media, MLB or other suitable media, 
should be aseptically added to a sterile container to which the swab 
and its transport media are added. Mix or swirl thoroughly. 
3. All swabs are incubated at 25ºC- 30ºC for at least 14 days to allow 
for the resuscitation of potentially stressed microbes. 
4. Hycheck slides and RODAC plates should promptly be incubated at 
30-35ºC for 2 days and then 20 ºC -25 ºC for 5 days. Longer 
incubation times may be required when contaminants are suspected 
to be slow growing. Check plates daily for colony formation to 
minimize obscuring visualization of smaller colonies by over growth. 
a. Count and record the number of colony forming units for RODAC 
plates. A representative of each colony type should be picked 
and re-streaked for purity and subsequently identified. 
b. Count the number of colonies on both sides of the paddle for the 
Hycheck slide. Report the colony counts for each side of the 
paddle and a representative of each all colony type should be 
picked and re-streaked for purity and subsequently identified. 
5. Check all swabs/sponges daily for turbidity and subculture for 
isolation as turbidity is observed. All subculturing must be performed 
under LFH or BSC. If container does not allow for turbidity 
observation to be made, then subculture all environmental samples 
between Day 5 and 7. All environmental samples will be 
subcultured following day 14 incubation regardless of previous 
subculturing.

---