Учебно-методическое пособие по биологической химии часть 2 Обмен белков, обмен липидов, биохимия крови, печени, мочи, слюны

Цель работы: освоить метод количественного определения ами-
нотрансфераз в сыворотке крови. Уметь объяснить значение данного диаг-
ностического теста. 
Аминотрансферазы – ферменты, катализирующие межмолекулярный 
перенос аминогруппы с аминокислоты на кетокислоту. Наибольшее значе-
ние имеет определение активности 2-х ферментов: аспартатаминотрансфе-
разы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ). Эти ферменты обладают 
высокой каталитической активностью, широко распространены в различ-
ных органах и тканях: сердечная мышца, печень, почки, скелетная муску-
латура, т.п. 
А. С использованием стандартных реактивов 
Принцип метода: основан на способности образующейся в результате 
реакции пировиноградной кислоты давать с 2,4-динитрофенилгидразином 
динитрофенилгидрозон пировиноградной кислоты коричнево-фиолетового 
цвета. Интенсивность окраски пропорциональна количеству высвободив-
шейся в ходе реакции пировиноградной кислоты. 
Порядок выполнения работы: 
В две пробирки налить по 10 капель субстратно-буферного раствора 
для определения АсАТ (при определении АсАТ) или субстратно-буферной 
смеси для определения АлАТ (при определении АлАТ). В опытную про-
бирку добавить 10 капель сыворотки крови и инкубировать обе пробирки в 
суховоздушном термостате при 37° в течение 30 минут. Внести в кон-
трольную пробирку 10 капель сыворотки. В обе пробирки добавить по 10 
капель 2,4-динитрофенилгидразина и оставить на 20 минут при комнатной 
температуре. Затем в обе пробирки добавить по 5 мл 0,4н. раствора NaOH. 
Перемешать и оставить на 10 минут для развития окраски. 
Фотоколориметрировать в кювете толщиной 1 см опыт против контро-
ля при зеленом светофильтре. 
Расчет активности произвести по формуле: 
Х = Е» 133 = ед/мл, 
где: 
X – активность фермента 
Е – экстинкция
133 – коэффициент пересчета 

---

14 
1 мкг ПВК = 0,015 ед. Е; отсюда 1 ед. Е = 133 мкг ПВК. 
В сыворотке крови здоровых людей активность АсАТ равна 5-40 ед/мл 
(0,1-0,5 мкМ/мл), АлАТ 5-30 ед/мл (0,1-0,7 мкМ/мл) за 30 минут.