Don va don maxsulotlari biokimyosi

4-лаборатория иши


Мавзу: Буғдой уни ва унган дон ўсимтасини α ва β-амилаза фаоллигини колорометрик усулда аниқлаш


Ишдан мақсад: Каталаза активлигини аниқлаш усулларини ўрганиш
Асосий тушунча: Маълумки нафас олиш жараѐнида моддаларнинг оксидланиши натижасида,ортиқча маҳсулот сифатида қисман водорот пероксид ҳосил бўлади. Агар ҳосил бўлган водорот пероксиднинг концентратцияси меъѐридан ошиқ бўлса,цитоплазмага заҳарли таъсир этиши мумкин.Шунинг учун ҳам ўсимлик тўқималарига каталаза ферменти ҳосил бўлган водорот перексидни сув ва кислородгача парчалаб туради.
Асбоб ва ускуналар
Буғдойнинг майсаси 3% ли водорот пероксид эритмаси,чинни ҳавонча, каталазани аниқловчи асбоб,пипеткалар,цилиндр идиш, майдаланган шиша идиши,тарози,соат,кальций карбонат-CaCO₃
Solod fermentlarni ajratib olish. α – amilazani solod ferment kompleksining asosiy eritmasidan β – amilazani inaktivlashtirish (aktivligini yo‗qotish) bo‗yicha ajratiladi. 100 ml hajmdagi kolbaga 20 ml solodning asosiy eritmasidan solib, 15 minut davomida 70⁰S haroratda qizdiramiz. β – amilaza shu haroratda inoaktivlashadi. Qizdirilgan eritmani sovutamiz va α – amilazani aktivligini aniqlash uchun ishlatamiz. α – amilazani aktivligini rN5,5. 5,8 bo‗ladi,
sovutilgandan keyin eriitmaga 4 ml rN 5,6 fosfatli bufer qo‗shiladi.
β – amilaza solod sutidan (solodovaya vыtyajka) α – amilazani nordon muxitda inaktivlashtirish yo‗li bilan ajratiladi. 100 ml hajmli kolbaga 20 ml solodni asosiy eritmasi solib, muzli hammomda 10 minut davomida ushlab unga 1 ml 0,1 n li HCl eritmasini qo‗shamiz. Hosil bo‗lgan eritmani muz hammomida 15 minut qoldiramiz va unga 3 ml rN 6,0 fosfatli bufer qo‗shamiz (β – amilaza uchun optimal rN)
Solodni amilolitik aktivligini aniqlash. SHtativga 3 qator qilib nomerlangan prrobirkalar qo‗yamiz. Birinchi qatordagi hamma probirkalarga pipetka bilan 1 ml dan distillangan suv quyamiz, birinchi probirkaga 1 ml α – amilaza eritmasini qo‗shamiz. Birinchi proibirkadagini aralashtirib, unga ―grusha‖ dan pipetka orqali xavo yuboramiz. Birinchi proibrkadan pipetka orqali 1 ml olib, uni 2 chi probirkaga solamiz. 2 chi probirkani aralashtirib, 1 ml olib 3 chi probirkaga solamiz. Xuddi shu yo‗l bilan 4 chi va 5 chi probirkalarda eritma tayyorlaymiz.
Ikkinchi qatordagi probirkalarga β – amilaza eritmasini suyultirish yo‗li bilan qo‗shiladi. Uchinchi qatordagi probirkalarga solod ferment preparatining asosiy eritmasidan qo‗shiladi.
Hamma probirkalarda suyultirilgan ferment preparatlarini eritmalarni 1 ml dan qolishi kerak.
Hamma probirkalarni 40⁰S haroratda termostatlash kerak. Suv hammomidan probirkalarni olmay turib xar biriga 2 ml dan 0,1% kraxmal eritmasi 10 minutdan keyin esa 2 ml yod ishchi eritmasi qo‗shiladi. (0,1n HCl eritmasida tayyorlangan)
Rangli eritmalarni optik zichligini fotoelektrokolorimetrda o‗lchanadi. Bunda kyuvetaning qalinligi 10 mm, svetofiltrning to‗lqin uzunligi 670 nm bo‗ladi.
Eritmadagi kraxmalning qoldiq konsentratsiyasi (S_qol mg/ml) kalibrovkali egri chiziq orqali topiladi (4 rasm)
Gidrolizlangan kraxmal miqdorini (X, mg) quyidagi formula orqali topamiz:
X = (C_ber - S_qol) ^. V,
Bu erda: C_ber – ishchi eritmadagi kraxmal konsentratsiyasi, mg/ml;
S_qol – kalibrovkali egri chiziq orqali topilgan, ishchi eritmadagi kraxmalni qoldiq konsentratsiyasi, mg/ml;
V – kraxmal ishchi eritmasi hajmi, ml

Eksperiment natijalari quyidagi jadvalga yoziladi.

6.1-jadval

variant		Optik zichlik			Gidrolizlangan kraxmal miqdori, mg
		1	2	3		1	2	3
1 2 3 4 5	2 4 8 16 32

Solodni ishchi eritmasini optimal konsentratsiyasini topish va gidrolizini baholash kerak.