Методика проведения лабораторных анализов в свп, их клинико-диагностическое значение

Расчет. Поправку на контрольный опыт проводят по формуле:
(∆Е / ∆t)_оп – (∆Е / ∆t)_хол = (∆Е / ∆t)_скор.
Скорректированную величину опытной пробы используют в дальнейших расчетах. Расчет производят по формуле:
Активность, моль / (с ∙ м³) = нмоль / (с ∙ л) ∙ 10⁶ =
= V_р.с. / ε ∙ l ∙ V ∙ (∆Е / ∆t)_скор.
Условные обозначения:
V_р.с. – объем реакционной смеси, мл.
скор. – скорректированная величина опытной пробы
V – объем сыворотки, мл;
t – время реакции, с;
∆Е/∆t – изменение экстинкции за 1 сек.
l – толщина слоя кюветы (1см)
ε – молярный коэффициент (5,6 ∙ 10² м² ∙ моль^-1 при 340 нм)
∆Е – изменение экстинкции за промежуток времени.
Примечание. Определение активности фермента можно проводить по микрометоду. Для этого перед работой готовят смесь реактивов, состоящую из субстратно-буферного раствора, растворов НАДН и ЛДГ в соотношении 60 : 1 : 2. Опытная проба включает: смесь реактивов – 0,630 мл; сыворотку – 0,10 мл; α-кетоглутаровую кислоту – 0,02 мл. Определение проводят по той же схеме, что и в макрометоде.
Пошаговое проведение методики.

1. 
   Сухие пробирки номеруют № 1-опытная проба и № 2-контрольная проба
   
2. 
   В пробирки № 1 и 2 наливают по 3 мл субстратно-буферного раствора.
   
3. 
   В пробирки № 1 и 2 добавляют по 0,05 мл НАДН раствора.
   
4. 
   В пробирки № 1 и 2 приливаю по 0,1 мл суспензии ЛДГ.
   
5. 
   В опытную пробирку прибавляют 0,5 мл сыворотки крови.
   
6. 
   В контрольную пробирку прибавляют 0,05 мл 154 ммоль/л раствора NaCl.
   
7. 
   Содержимое опытной и контрольной пробирок перемешивают и ставят в термостат при 37⁰ С на 10 мин.
   
8. 
   После инкубации в пробирки №1 и 2 добавляют раствор α-кетоглутаровой кислоты.
   
9. 
   Измеряют экстинкции опытной и контрольной пробирок против воды на спектрофотометре при длине волны 340 нм в кювете с толщиной слоя в 1 см.