Disk elektroforezi (Devis, 1959)
Poliakrilamid gelning kashf qilinishi bilan bog'liq.Bu atama ingliz tilidan discontinuous= uzluksiz, bir xil bo'lmagan. Ikki qatlamdan iborat minimal versiyada gel hosil bo'ladi: konsentratsiyalovchi gel va ajratuvchi (ishchi) gel (akrilamidning turli% konsentratsiyasi). Konsentratsiyalovchi gelga (past konsentratsiyali, katta teshikli) ajratiladigan aralashman solinadi. Bu aralashmaning ixcham qism shaklida ajratuvchi gelga kirishiga imkon beradi, bu esa tarkibiy qismlarni keyingi samarali ajratish uchun muhimdir. Ajratish jarayonining o'zi ajratuvchi gel qalinligida sodir bo'ladi (u ma'lum bir konsentratsiyali akrilamid bilan 1 yoki undan ortiq qatlamlardan iborat bo'lishi mumkin).
Disk elektroforezi
Gel ikki qismdan iborat. Barcha buferlarda noorganik tuzlar mavjud emas, ulardagi asosiy oqim tashuvchisi glitsindir.
Konsentratsiyali gel pH 6,5 va poliakrilamid konsentratsiyasi taxminan 4% ni tashkil qiladi.
pH 6,5 da glitsin molekulasining umumiy zaryadi nolga yaqin. Natijada, ma'lum bir zaryadni o'tkazish uchun (bu elektroforetik hujayradagi oqim kuchi bilan belgilanadi) SDS bilan polipeptidlarning manfiy zaryadlangan komplekslari yuqori tezlikda harakatlanishi kerak.
2. Ajratish gelida pH 8,5-9 va poliakrilamid konsentratsiyasi 10-20% ni tashkil qiladi.
pH 8,8 da glitsin manfiy zaryadga ega bo'ladi, konsentratsiya qiluvchi va ajratuvchi gellar chegarasida oqsillar keskin tormozlanadi (bir xil zaryadni birlik maydoni orqali o'tkazishda ko'proq zaryadlangan molekulalar ishtirok etadi, shuning uchun ular bir vaqtning o'zida past tezlik harakat qiladilar).
Gellarning chegarasida oqsillarning kontsentratsiyasi - usulning imkoniyatlarini oshiradi.
Ajratish jelida oqsillar polipeptid zanjirining uzunligiga qarab, ya'ni molekulyar og'irligiga teskari proportsional ravishda ko'chiriladi.
PAAGni tayyorlash uchun dastlabki komponentlar alohida eritmalar shaklida tayyorlanadi. U gelga elektr o'tkazuvchanlik xususiyatlarini berish uchun buferni o'z ichiga oladi.
Do'stlaringiz bilan baham: |
