Eritmalar ishlatishdan oldin darhol aralashtiriladi va darhol tegishli qoliplarga (plitalar yoki tsilindrlarga) quyiladi, bu erda gel polimerizatsiyasi sodir bo'ladi.
Ajratuvchi gelning har bir qatlami ketma-ket hosil bo'ladi. Jarayon kontsentratsiyali gelning polimerizatsiyasi bilan yakunlanadi (jarayon pastdan yuqoriga o'tadi). Ushbu gelda, oldindan, boshlang'ich chizig'ida yacheykalar (chuqurchalar) hosil bo'ladi, bu erga ajratiladigan aralashma kiritiladi.
Disk elektroforezini o'rnatishning umumiy sxemasi
Tok manbai
+
Katod kamerasi
Anod kamera
Shisha yoki plastik trubka
Konsentrlovchi gel qatlami, 5% PAAG
Ajratish (ishchi) gel qatlami, 7,5% PAAG
Tris-glisin buferi bilan to'ldirilgan katod va anod kameralari, pH 9,5
ELEKTROPORETIK HARAKATCHANLIKKA TURLI OMILLARNING TA'SIRI
Zaryad, zarrachalar hajmi, elektrolitlar qovushshqoqligi va kuchlanish gradientining ta’siri. Zaryadlangan zarrachaning elektroforetik harakatchanligi to'g'ridan-to'g'ri zaryadning kattaligiga bog'liq va zarrachaning o'lchamiga teskari proportsionaldir, bu esa o'z navbatida uning molekulyar og'irligiga bevosita bog'liq. Elektroforez bilan tahlil qilinadigan peptidlar va boshqa biologik faol moddalar odatda ideal sferik shaklga ega emas va Stoks qonuniga bo'ysunmaydi, ularning elektroforetik harakatchanligi (u0) quyidagi tenglama bilan tavsiflanadi:
bu yerda v - zarracha tezligi;
E - elektrolit ustiga qo'yilgan kuchlanish gradienti;
A - shakl omili, odatda 4 dan 6 gacha bo'lgan diapazonda, harakatchanlikning radius kvadrati bilan teskari munosabatini ko'rsatadi. Molekulyar og'irlik nuqtai nazaridan, bu harakatchanlik va molekulyar og'irlik birligining 2/3 qismi o'rtasidagi teskari munosabatni nazarda tutadi;
Q - zarracha zaryadi;
r - zarracha radiusi;
η - elektrolitlarning qovushqoqligi.
pH qiymatining ta'siri. Elektroforetik harakatchanlik eritmaning pH qiymatiga bog'liq bo'lib, bu moddaning ionlanish darajasiga ta'sir qiladi. Misol tariqasida, rasmda glitsinning harakatchanligining pH qiymatiga bog'liqligi ko'rsatilgan.
Nisbiy harakatchanlik
katodga nisbatan←0→ anodga nis-n
pKa 2,2 va 9,9 qiymatlari grafikning burilish nuqtalariga to'g'ri keladi. Tegishli funktsional guruhlar pH = pKa da 50% ionlanganligi sababli, bu nuqtalarda elektroforetik harakatchanlik mos ravishda juda past va juda yuqori pHda to'liq ionlangan kation va anion uchun kuzatiladigan yarmiga teng. pH qiymatining oraliq diapazonida mavjud bo'lgan tsvitter-ion elektr neytral va nol harakatchanlikka ega.
Do'stlaringiz bilan baham: |
