KLİNİK İmmunolojide hastaliğin tanisi iÇİN

ÇALIŞMA PRENSİBİ;

• ÇALIŞMA PRENSİBİ;

• Fluoresanlanmış (FITC ile) M Ab ile işaretlenmiş hücreler

• Sıvı bir ortamda sıra halinde uyarıcı ışıktan (Argon lazer) 488nm’de geçirilirler

•  Uyarıcı ışığı
•  Hücreler kırarlar veya
•  Florokromla işaretlenmiş m Ab’lerin bağlandığı hücre tarafından emilir ve yayılır
•  Bu yayılan ışığın şiddetini ve niteliğini algılayan dedektörler bilgisayara aktarırlar
•  Buna göre;
• ♣ Hücrenin tipi ve sayısı belirlenir

KLİNİK KULLANIMI

• KLİNİK KULLANIMI

•  Lökosit fenotiplemesi (EN SIK)
•  Konjenital veya kazanılmış immun yetersizlik tanısı (en sık AIDS)
•  HIV pozitifliğinde prognoz değerlendirilmesi
•  İmmun yetersiz hastalarda immuniteyi yada kemoterapi monitörizasyonu
•  KİT yapılan hastalarda yeni immun durumun takibi
•  Tümör hücre fenotiplemesi
•  Lösemi ve lenfoma tanı ve sınıflaması
•  B lenfositlerinde klonal tayini ve lenfoma ve lösemi ayırımında
•  Hücre içi antijenlerin (myeloperoksidaz miktarı) tayini
•  Hematopoetik hücrelerin (CD4)
•  Hematopoetik olmayan
•  Tümörler ve hücrelerden ayırt edilmesi

DNA analizi

• DNA analizi

•  Anöploidi tayini
•  Hücre siklüsu kinetiğinin belirlenmesi
•  Apoptozis

• Nötrofil fonksiyon analizleri

•  O2’nin oluşumunun tayini ile;
•  Granulomatoz hastalık tayini

• Diğer kullanım alanları

•  Retikülosit sayımı
•  Transplant hastalarında Cross-Match
•  Sitogenetik

ENFEKSİYON HASTALIKLARINDA

• ENFEKSİYON HASTALIKLARINDA

•  Mikroorganizma- hedef hücre ilişkisi;
•  Apoptozisin incelenmesi
•  HIV ile enfekte kişilerde
• ♣ Monunükleer hücrelerinde apoptosis oranları
•  CD8 T ve
•  CD19 B hücrelerinde en sıktır
•  Konak hücreye ait proteinlerdeki değişimler
• EBV ile enfekte B lenfositlerinde;
• ♣ BCR2 ekpresyonu
• HIV ile enfekte T lenfositlerinde;
• ♣ CD4 ekpresyonu
• CMV ile fibroblastlarda;
• ♣ MHC I ekpresyonu

•  Mikroorganizmanın hücreye bağlanmasının incelenebilmesi
•  EBV’nin
• ♣ B lenfositlerine
• ♣ Epitel hücrelerine
•  CR2 reseptörüne
•  Poliovirus
• ♣ MNH CD14 reseptörlerinde
•  Kızamık virusu
• ♣ Hedef hücrelerin CD46 reseptöründe
•  Hücre içi ve yüzeyi mikroorganizma antijenlerini inceleme
•  VZV ile enfekte hücre yüzeyinde
• ♣ gp1
•  HIV ile enfekte CD4 T lenfositlerinde
• ♣ gp 160/120
•  İnfluenzae ile enfekte hücrelerde
• ♣ HA antijenileri

•  Klinik virolojide kullanılmaktadır
•  Enfekte kişilerin hücrelerinden
•  Virusle enfekte olanları süratle belirler
• ♣ CMV ile enfekte MNH’ler kantitatif olarak
• ♣ HIV seropozitif kişilerde
•  MNH’ lerde kantitatif Ag tayini  Böylelikle;
• *Antiviral tedavinin izlemi
•  Spesifik antikor tayini
•  CMV, HSV, HIV gibi viruslara
•  H. pylori gibi bakterilere
•  T.gondii gibi parazitlere karşı
•  Gelişen spesifik Ab’ler ölçülebilir

a) Lenfosit izolasyonu

• a) Lenfosit izolasyonu

• Dansite- Gradient Santrifüj Yöntemi

•  Kan hücre grupları birbirinden farklı dansite özelliğine sahiptir
•  3 ml ficol-isopak (Dansite 1077 gr/lt) konur
•  3 ml heparinli periferik kan konur
•  1500 devirde, 45 dakika santrifüj edilir
•  Lenfositler orta tabakada yoğunlaşırlar
•  En altta eritrosit ve granülositler
• ♣ Dansiteleri 1077 ‘den fazla
•  En üstte buff-coat toplanır
• ♣ Dansiteleri 1077’den düşük
• ♣ Buff- Coat’dan
•  Trombositler (santrifüj)
•  Monositler petri kabında tutularak uzaklaştırılır

b) Lenfosit ayırımı

• b) Lenfosit ayırımı

• T lenfosit ayırımı

•  Rozet testi
•  Koyun eritrositlerine karşı CD2 reseptörü vardır
•  Periferik kanda E-Rozet yapan
•  %65-70 T lenfosit vardır
•  B lenfositi E-Rozet yapmaz

B lenfosit ayırımı

• B lenfosit ayırımı

•  Direkt immun fluoresan yöntemi
•  Fluoresanlanmış (FITC) anti- Ig Ab ile yapılır
•  Toplam lenfositlerin %20-25’i B lenfositleridir

• Periferik kandaki

•  T ve B lenfosit oranını saptamak
• İmmun yetmezlik hastalıklarının tanısında
• Lenfosit lösemi ve lenfomadaki lenfosit tipinin tayininde
• Otoimmun hastalıklar ve kanserli olgularda hücresel immun yanıtın değerlendirilmesinde kullanılır

•